Akura PLUS Hanging Drop System

产品简介

InSphero Akura PLUS悬滴系统是一种简单、灵活且能兼容自动化系统的操作平台，用于无支架3D细胞培养、观察和观测。每套InSphero Akura PLUS悬滴系统是由一块InSphero Akura PLUS悬滴板和一块InSphero Akura 96孔细胞微孔板组成。平日里，InSphero将该悬滴系统用于大规模的无支架3D细胞培养、类器官培养和即用型细胞微组织的生产。

产品优势

1. 使用InSphero Akura PLUS悬滴板可以形成稳健的包含细胞微球体的悬滴，轻松开展无支架3D细胞培养、类器官培养等工作

2. 包含细胞微球体的悬滴可以方便地转移到InSphero Akura 96孔细胞微孔板中继续培养

3. 细胞微球体在具有特殊设计的InSphero Akura 96孔细胞微孔板中，可以方便地进行长时间的培养、分析和观察

自备材料

1. 实验细胞与合适的培养基

2. 倒置显微镜

3. 细胞计数工具

4. 移液器/自动化液体处理系统

5. 板孔离心机

6. 二氧化碳培养箱（设置为5%浓度二氧化碳，95%相对湿度，37摄氏度）

7. PBS

实验前准备

1. 培养基于37摄氏度预热

2. 用70%乙醇擦拭微孔板的外包装

3. 在无菌操作环境下小心地打开微孔板的外包装

4. 检查InSphero Akura PLUS悬滴系统里的组分是否完整：

(1) InSphero Akura PLUS悬滴板：带有蓄液功能的底板，悬滴板框架，板盖，加湿垫和镊子

(2) InSphero Akura 96孔细胞微孔板：微孔板，板盖

实验步骤

加湿垫准备

1. 准备一个具有蓄液功能的无菌容器（如10cm细胞培养皿），向其中加入20mL的0.5X PBS

2. 取出加湿垫，用镊子夹取加湿垫转入装有PBS的容器中浸泡直至加湿垫完全湿润（此过程约需要5min）

3. 将悬滴板框架从底板中暂时移出，用镊子夹取加湿垫并放置在底板中，放回悬滴板框架

细胞接种和悬滴形成

1. 依据实验设计，将要接种的细胞或细胞混合物制备成单细胞悬液

2. 使用血球计数板或其他合适的细胞计数工具进行细胞计数，并确定合适的细胞接种密度

3. 使用移液器充分吹洗细胞悬液，确保悬液中的细胞均匀分布，并取合适数量的细胞，用培养基将体积补足40uL

* 推荐的细胞接种密度：用于增殖细胞的长期培养，建议使用较低的起始密度，建议每孔接种250-500细胞；用于非增殖细胞的培养或需要快速获得较大体积的细胞微球体，建议每孔接种2500-25000细胞

4. 缓慢地将40uL的细胞液接入悬滴板上对应的培养孔中，在加入液体时要确保吸头尖端与板子间的紧密接触

5. 板盖盖好后转移入二氧化碳培养箱中培养，并定期评估细胞微球体的生长状况。正常情况下，大部分类型的细胞经过4天的培养便可以聚集形成紧密的细胞微球体

* 需注意：在移动InSphero Akura PLUS悬滴板时需要格外当心，以防止悬滴液的滴落而影响实验结果

细胞微球体的转移

* 如需要长期培养细胞微球体，则要将细胞微球体转移入InSphero Akura 96孔细胞微孔板中

InSphero Akura 96孔细胞微孔板的介绍和使用方法请参考相应的使用说明。在开始操作本步骤之前，应该按照要求提前预湿润InSphero Akura 96孔细胞微孔板

1. 将InSphero Akura PLUS悬滴板的悬滴框架小心取下，置于InSphero Akura 96孔细胞微孔板的上方。两者可以通过板框周边的三个针脚确定位置

2. 使用移液器缓慢地向InSphero Akura PLUS悬滴框架的每个孔中加入70uL的培养基，在加入液体时要确保吸头尖端与板子间的紧密接触。加入液体后，悬滴便会落入下方的InSphero Akura 96孔细胞微孔板相应培养孔中

3. 使用倒置显微镜检查每个培养孔中的细胞微球体是否成功转移

4. 将InSphero Akura 96孔细胞微孔板盖好盖子并放入板孔离心机中，250 x g（RCF）离心2min，以帮助去除培养孔内的残留气泡并帮助细胞沉降至培养孔的底部

5. 为了确保每个培养孔中的培养基体积准确，应执行换液操作，吸去培养孔内的所有培养基，然后重新加入70uL的新鲜培养基（遵照InSphero Akura 96孔细胞微孔板的使用说明执行更换培养基的操作）